Validación de método de preservación, viabilidad y expansión celular a partir de sarcomas criopreservados en el biobanco.
Resumen
Introducción: Un Biobanco (BB) es una institución pública o privada sin ánimo de lucro que recolecta y almacena muestras biológicas humanas para la investigación biomédica. Surgieron para disponer de grandes cantidades de muestras de calidad para estudios de alto rendimiento y colecciones representativas de diversas patologías. El primer biobanco registrado data de 1951 con la línea celular HeLa en el Hospital Johns Hopkins. Actualmente, los biobancos se dividen en dos tipos: orientados a poblaciones y a patologías específicas, siendo los primeros para estudios genéticos poblacionales y los segundos, relacionados principalmente con enfermedades oncológicas.
La Comisión Europea destaca cinco funciones principales de un biobanco: (i) recoger y almacenar material biológico y epidemiológico; (ii) permitir proyectos dinámicos; (iii) asociarse con investigaciones actuales y futuras; (iv) aplicar la codificación o anonimato para la privacidad del donante, y (v) incluir estructuras de gobierno y procedimientos que protejan los derechos de los donantes.
Los biobancos dependen de muestras clínicas y líneas celulares. Las muestras clínicas son esenciales para identificar proteínas vinculadas a observaciones clínicas importantes, mientras que las líneas celulares permiten estudios moleculares detallados y el análisis de efectos de fármacos en estudios preclínicos. La disponibilidad de muestras de sarcomas es escasa, por lo que las muestras y cultivos celulares de biobanco son cruciales para su estudio.
Este trabajo tiene como objetivo describir la técnica de recolección y preservación de muestras de sarcomas en un biobanco y evaluar su viabilidad y capacidad de expansión celular tras la criopreservación.
Materiales y métodos: Se incluyeron muestras de sarcomas previamente criopreservadas en viales criogénicos en un biobanco. Las muestras provinieron de pacientes sometidos a cirugía de conservación de miembro sin tratamiento neoadyuvante. Se excluyeron muestras con menos de 6 meses de congelación, no sarcomas y aquellas con tratamiento previo a la cirugía.
Los viales se descongelaron progresivamente y se analizaron fragmentos mediante inmunohistoquímica para evaluar viabilidad celular post-descongelamiento. El resto se destinó a cultivos celulares utilizando dos métodos: explante y disgregación enzimática, ambos con medios suplementados específicos. Se comparó la velocidad de proliferación celular de las muestras.
Resultados: Se recolectaron 3 crioviales del biobanco. Todas las muestras mostraron viabilidad tumoral y celular según análisis patológico.
- Muestra 1:
- Método de explante: Viabilidad celular con proliferación casi nula.
- Método de disgregación celular: Proliferación del 80% de confluencia celular en 4 semanas, permitiendo un primer pasaje celular. Confirmación de células tumorales por patología.
- Muestra 2:
- Método de explante: Viabilidad y proliferación celular en ambos crioviales.
- Método de disgregación enzimática: Un criovial con colagenasa al 0,1% no proliferó, pero con colagenasa al 0,02% se logró proliferación celular.
- Muestra 3:
- Método de explante: Ausencia de proliferación celular.
- Método de disgregación celular: Viabilidad y proliferación celular observadas.
Discusión: La preservación celular en biobancos es una práctica establecida desde la línea celular HeLa, crucial para la investigación de proteínas específicas y terapias dirigidas. Nuestro biobanco demostró que la criopreservación mantiene la viabilidad de las muestras, esencial para los estudios de sarcomas. La heterogeneidad de los sarcomas añade complejidad a la estandarización de cultivos celulares, sugiriendo que cada tipo de tumor puede requerir métodos específicos de cultivo.
Conclusión: Las muestras de sarcomas criopreservadas en el biobanco han demostrado viabilidad y capacidad de expansión celular. Es necesario definir el mejor método para optimizar los cultivos, dada la variabilidad de los sarcomas.
